Conţinut
- Ce este un genotip și un fenotip?
- Explicarea genotipării HIV
- Explicarea fenomenului de tip HIV
- Când se efectuează un test de rezistență genetică?
Când se produce eșecul tratamentului, trebuie selectate combinații alternative de medicamente pentru a suprima această nouă populație de virus rezistent. Testarea rezistenței genetice ajută la facilitarea acestui lucru prin identificarea tipurilor de mutații rezistente în „rezerva virală” a unei persoane, în timp ce se constată cât de sensibili sunt acești viruși la posibili agenți antiretrovirali.
Două instrumente principale sunt utilizate pentru testarea rezistenței genetice la HIV: Testul genotipic HIV si Test fenotipic HIV.
Ce este un genotip și un fenotip?
Prin definiție, un genotip este pur și simplu structura genetică a unui organism, în timp ce un fenotip este caracteristicile sau trăsăturile observabile ale acelui organism.
Testele genotipice (sau genotiparea) funcționează prin identificarea instrucțiunilor moștenite în cadrul codificării genetice a unei celule sau a ADN-ului. Testele fenotipice (sau fenotiparea) confirmă exprimarea acelor instrucțiuni sub influența diferitelor condiții de mediu.
În timp ce asocierea dintre genotip și fenotip nu este absolută, genotiparea poate fi adesea predictivă a fenotipului, în special atunci când modificările din codul genetic conferă modificări așteptate ale trăsăturilor sau caracteristicilor - ca în cazul dezvoltării rezistenței la medicamente.
Fenotiparea, pe de altă parte, confirmă „aici-și-acum”. Acesta își propune să evalueze reacția unui organism la schimbări specifice ale presiunii mediului, cum ar fi atunci când HIV este expus la diferite medicamente și / sau concentrații de medicamente.
Explicarea genotipării HIV
Genotiparea HIV este, în general, cea mai comună tehnologie utilizată pentru testarea rezistenței. Scopul testului este de a detecta mutații genetice specifice în gag-pol regiunea virusului " genomului (sau cod genetic). Aceasta este regiunea în care enzimele de transcriptază inversă, protează și integrază - țintele majorității medicamentelor antiretrovirale - sunt codificate pe lanțul ADN.
Amplificând mai întâi genomul HIV folosind tehnologia de reacție în lanț a polimerazei (PCR), tehnicienii de laborator pot secvența (sau „harta”) genetica virusului utilizând diverse tehnologii de detectare a mutațiilor.
Aceste mutații (sau acumularea de mutații) sunt interpretate de tehnicieni care analizează relația dintre mutațiile identificate și susceptibilitatea așteptată a virusului la diferite medicamente antiretrovirale. Bazele de date online pot ajuta comparând secvența de testare cu cea a unui prototip de virus „sălbatic” (adică HIV care nu conține mutații rezistente).
Interpretarea acestor teste este utilizată pentru a determina susceptibilitatea la medicamente, numărul mai mare de mutații cheie conferind niveluri mai ridicate de rezistență la medicamente.
Explicarea fenomenului de tip HIV
Fenotiparea HIV evaluează creșterea HIV a persoanei în prezența unui medicament, apoi o compară cu creșterea unui virus de control, de tip sălbatic, în același medicament.
Ca și în cazul testelor genotipice, testele fenotipice amplifică regiunea gag-pol a genomului HIV. Această secțiune a codului genetic este apoi „altoită” pe o clonă de tip sălbatic folosind tehnologia ADN-ului recombinant. Virusul recombinant rezultat este utilizat pentru infectarea celulelor de mamifere in vitro (în laborator).
Eșantionul viral este apoi expus la concentrații crescânde ale diferitelor medicamente antiretrovirale până la 50% și 90% supresie virală. Concentrațiile sunt apoi comparate cu rezultatele testului de control, de tip sălbatic.
Modificările relative „de pliere” oferă intervalul valoric după care se determină susceptibilitatea la medicamente. O schimbare de patru ori înseamnă pur și simplu că de patru ori cantitatea de medicament a fost necesară pentru a obține supresia virală în comparație cu cea de tip sălbatic. Cu cât valoarea este mai mare, cu atât virusul este mai puțin sensibil la un anumit medicament.
Aceste valori sunt apoi plasate în limite clinice inferioare și clinice superioare, valorile superioare conferind niveluri mai ridicate de rezistență la medicamente.
Când se efectuează un test de rezistență genetică?
În S.U.A., testarea rezistenței genetice se efectuează în mod tradițional la pacienții care nu au primit tratament pentru a determina dacă au rezistență la medicamente „dobândită”. Studiile efectuate în SUA sugerează că între 6% și 16% dintre virusurile transmise vor fi rezistente la cel puțin un medicament antiretroviral, în timp ce aproape 5% vor fi rezistente la mai multe clase de medicamente.
Testarea rezistenței genetice este, de asemenea, utilizată atunci când rezistența la medicamente este suspectată la persoanele în tratament. Testarea se efectuează în timp ce pacientul ia schema de eșec sau în termen de patru săptămâni de la întreruperea tratamentului dacă încărcătura virală este mai mare de 500 de copii / ml. Testarea genotipică este, în general, preferată în aceste cazuri, deoarece acestea costă mai puțin, au un timp de răspuns mai rapid și oferă o sensibilitate mai mare pentru detectarea amestecurilor de virus de tip sălbatic și rezistent.
O combinație de testare fenotipică și genotipică este în general preferată pentru persoanele cu rezistență complexă, multi-medicament, în special pentru cei expuși la inhibitori de protează.